故事发生在充满黑手党活动的神枪少女意大利。表面上，神枪少女“社会福祉公社”是神枪少女一所专为孤苦少女提供的福利院，但背地里，神枪少女这里却成为了专门训练杀手的神枪少女场所。女孩们在被洗脑后接受肢体改造和实战训练，神枪少女最终成为极具战斗力的神枪少女杀人武器。其中，神枪少女海瑞塔（南里侑香 配音）、神枪少女莉可（三桥加奈子 配音）、神枪少女崔耶拉（仙台惠理 配音）、神枪少女克拉耶斯（小清水亚美 配音）和安琪莉可（寺门仁美 配音）五人最为出色。神枪少女每个女孩都有一个年长男性辅佐官，神枪少女照顾她们的神枪少女生活起居并给予指导。尽管身份为杀手，神枪少女但这些少女对各自的辅佐官有着深厚的信任与感情。敌人“五共和国派”是一个恐怖组织，为了争取独立自由而无所不用其极。随着残酷的战斗不断升级，这些无依无靠的少女们不得不面对死亡和悲伤的命运，在绝望中挣扎求生。《神枪少女》不仅描绘了她们作为杀手的训练和战斗，更深刻地探讨了人性、牺牲与成长的主题。
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